Cómo preparar un portaobjetos para microscopio

Los portaobjetos para microscopio se utilizan para examinar a los organismos unicelulares, y para observar de cerca a las plantas pequeñas y organismos. Existen dos tipos de portaobjetos preparados: el montaje en seco y el montaje húmedo. Cada tipo de método de preparación se utiliza para realizar el análisis de los distintos tipos de células. Si vas a realizar el montaje húmedo de un espécimen particularmente pálido o translúcido, es posible que necesites teñir el espécimen, de forma que este se vuelva visible bajo el microscopio.

Método 1

Método 1 de 3:

Preparar un montaje en seco

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Elige un portaobjetos limpio. Sostén el portaobjetos en frente de una fuente de luz y mira a través de este para asegurarte de que no tenga manchas o suciedad. La mayoría de los portaobjetos para microscopio son planos en la parte superior e inferior, y cuentan con una forma rectangular. Son transparentes, lo cual permite que la luz del microscopio pase a través de ellos e ilumine la muestra transparente del espécimen. Si el portaobjetos se encuentra sucio, o tiene manchas, no podrás examinar con eficacia el espécimen.^{[1]XFuente de investigación}
- Si descubres que el portaobjetos para microscopio se encuentra contaminado de alguna forma, así sea con tus huellas dactilares, lávalo rápidamente utilizando jabón líquido y agua. Seca el portaobjetos usando un trapo limpio. No utilices pañuelos o papel absorbente para limpiarlo, ya que estos podrían dejar rastros de pelusa en el portaobjetos.
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Revisa el espécimen y determina si necesita rebanarse. La muestra del espécimen deberá ser translúcido (o semitransparente), o llegar a ser transparente por completo, para que la luz pueda atravesarlo. Si la luz no es capaz de atravesar por completo el espécimen y dirigirse hacia dentro del ocular del microscopio, entonces no podrás observar el espécimen a través del microscopio.^{[2]XFuente de investigación}
- Algunos de los especímenes (por ejemplo, una hebra de cabello o el ala de un insecto) son delgados y translúcidos por cuenta propia, así que no necesitarás rebanarlos con una cuchilla de afeitar.
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Rebana un pedazo delgado de la muestra del espécimen. Utiliza una cuchilla de afeitar para cortar el material del espécimen hasta obtener una rebanada delgada y translúcida. Los montajes en seco son los más sencillos de preparar, debido a que no requieren del uso de ningún líquido que vaya entre el portaobjetos y el espécimen. Un montaje en seco resulta ideal para el análisis de aquellas muestras que no se encuentren en riesgo de secarse por completo. Entre los materiales que se utilizan comúnmente en los montajes en seco, tenemos:^{[3]XFuente de investigación}
- corcho o madera para balsas
- pétalos u hojas de flores
- patas o alas de insectos
- cabello, pelaje, o plumas
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Coloca la muestra del espécimen sobre el portaobjetos. Utiliza un par de fórceps para recoger la rebanada delgada de la muestra del espécimen. Recuéstala de una manera delicada sobre uno de los lados del portaobjetos. Si vas a utilizar un portaobjetos cóncavo (el cual tiene un lado hundido), coloca el espécimen en el centro de la zona cóncava.^{[4]XFuente de investigación}
- Si te preocupa que el espécimen se mueva de un lado a otro, o se deslice fuera del lado plano, entonces realiza el montaje del espécimen sobre un portaobjetos cóncavo. Por ejemplo, si vas a preparar el pétalo de una flor rizada, y este se mueve hacia un lado o el otro, entonces utiliza un portaobjetos cóncavo.
- Un portaobjetos plano funcionará bien con todos los demás tipos de especímenes.
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Coloca un cubreobjetos encima de la muestra del espécimen. El cubreobjetos evitará que la muestra del espécimen se deslice fuera del portaobjetos.^{[5]XFuente de investigación} El cubreobjetos también protegerá a la muestra del espécimen, en el caso de que uno de los usuarios del microscopio baje accidentalmente el lente, y termine presionando el espécimen.
- Los cubreobjetos son unas piezas transparentes de vidrio, o más comúnmente, de plástico, las cuales son bastante delgadas. Cada cubreobjetos tiene una dimensión aproximada de 2 cm (3/4 de pulgada), tanto de ancho como de longitud.
- El portaobjetos se encontrará preparado y listo para su inspección bajo el microscopio.
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Método 2

Método 2 de 3:

Preparar un montaje húmedo

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Vierte 1 gota de agua sobre el portaobjetos. Utiliza un gotero para verter 1 gota de agua, exactamente sobre el centro de un portaobjetos plano o cóncavo. La gotita de agua es la razón por la cual se le llama montaje húmedo. El líquido mantendrá húmeda a la muestra del espécimen, y evitará que las muestras de los especímenes húmedos y orgánicos se sequen por completo y distorsionen su forma. El agua también preservará a los especímenes vivos, tales como los organismos unicelulares.^{[6]XFuente de investigación}
- Si te gustaría preparar un portaobjetos permanente utilizando un material orgánico que se encuentre muerto, puedes utilizar una capa delgada de esmalte de uñas transparente, en lugar de una gotita de agua.
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Raspa o rebana una sección de la muestra húmeda del espécimen. Las muestras de espécimen que se utilizan para preparar los montajes húmedos son, por lo general, material orgánico vivo o húmedo. Utiliza una cuchilla de afeitar o un mondadientes para cortar o raspar una pequeña cantidad del espécimen húmedo. Entre los materiales que se utilizan comúnmente para realizar los montajes húmedos en los portaobjetos, tenemos:^{[7]XFuente de investigación}
- Células de las mejillas o placa dental (se realiza un raspado dentro de tu boca utilizando un mondadientes).
- Una sección transversal delgada del tallo de una planta (cortado con una cuchilla de afeitar).
- Si vas a realizar el estudio de los organismos unicelulares (como, por ejemplo, una ameba o un paramecio), el uso de unas pinzas no resultará efectivo. En lugar de eso, utiliza un cuentagotas limpio para recoger un par de gotas de agua, en las cuales se encuentren sumergidos los organismos unicelulares o las algas.
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Coloca la muestra del espécimen en la gota de agua. Según el tipo de material que vayas a utilizar como la muestra del espécimen, deberás utilizar un par de fórceps, pinzas, o un mondadientes para trasladar el espécimen hacia el portaobjetos. Coloca el espécimen en el centro de la gotita de agua, de manera que este se encuentre suspendido en el líquido.^{[8]XFuente de investigación}
- Si vas a utilizar un cuentagotas para recoger organismos unicelulares, entonces vierte 1 o 2 gotas sobre la gota que ya se encuentra en el portaobjetos.
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Coloca un cubreobjetos encima del espécimen húmedo. Sostén el cubreobjetos en un ángulo de 45 grados. Coloca uno de los bordes exactamente al costado del espécimen sobre la gota de agua. Luego, desciende el otro lado del portaobjetos hasta que se encuentre en una posición completamente horizontal encima del espécimen. Verás la(s) gota(s) de agua esparcirse debajo del cubreobjetos hasta alcanzar los bordes.^{[9]XFuente de investigación}
- No des golpes o hagas alguna presión sobre el cubreobjetos una vez que se encuentre en posición. Si lo haces, corres el riesgo de apretar la muestra del espécimen junto con el agua, y hacer que se desprendan del portaobjetos.
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Método 3

Método 3 de 3:

Realizar una tinción de los especímenes celulares

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Coloca una lámina de papel absorbente sobre uno de los bordes del cubreobjetos. Coloca el papel sobre el borde del cubreobjetos sin alterar el material que se encuentra debajo de este. El poder de absorción del papel absorbente extraerá un poco del agua de la parte interior del cubreobjetos, y arrastrará el agente de tinción que se encuentre debajo del cubreobjetos, hacia el espécimen.^{[10]XFuente de investigación}
- En el caso de que el espécimen, sobre el cual vas a realizar un montaje húmedo en el portaobjetos, sea de un color pálido o incoloro (por ejemplo, la sección transversal del tallo de una planta incolora), es posible que resulte difícil de observar a través del microscopio. Realizar una tinción del espécimen te permitirá observar su forma y textura, de una mejor manera.
- Por lo general, este paso se realiza luego de que ya se examinó el espécimen húmedo en el portaobjetos, sin haberlo teñido. Es posible que el portaobjetos ya se encuentre preparado, incluso si no se realizó la tinción.
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Vierte 1 gota de yodo o azul de metileno sobre el otro lado del cubreobjetos. Utiliza un cuentagotas y vierte el químico de tinción encima del portaobjetos, directamente al costado del cubreobjetos. Sé cuidadoso y vierte solamente 1 gota. Es posible que un exceso del agente de tinción pueda llegar a deslizarse fuera del portaobjetos.^{[11]XFuente de investigación}
- Puedes comprar el yodo o el azul de metileno en cualquier tienda de materiales educativos, o tienda de suplementos de biología.^{[12]XFuente de investigación}
- Una manera alternativa de realizar este paso es verter la gota del agente de tinción en el agua que se encuentra en el portaobjetos del montaje húmedo, cuando recién lo vas a preparar. En este caso, no necesitarás utilizar el papel absorbente.
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Espera hasta que el agente de tinción se esparza debajo del cubreobjetos. El agente de tinción comenzará a filtrarse por debajo del cubreobjetos mientras el papel absorbente extrae el agua del otro lado.^{[13]XFuente de investigación} Es posible que proceso llegue a tardar hasta 5 minutos para que el yodo o el azul de metileno se sumerjan por debajo del cubreobjetos, y empapen el espécimen.
- Una vez que el yodo o el azul de metileno se hayan esparcido en toda el área del cubreobjetos, entonces se habrá realizado la tinción completa del espécimen.
Elimina las impurezas de la superficie del portaobjetos, de manera que ningún líquido suelto se derrame por el costado. La tinción en el montaje húmedo estará lista para observarse bajo el microscopio.^{[14]XFuente de investigación}
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Advertencias

Los portaobjetos y cubreobjetos para microscopio son pequeños y delicados. Manipula siempre estos elementos con cuidado, ya que pueden hacerse añicos o rayarse, con facilidad. Nunca dejes caer un portaobjetos o un cubreobjetos, y, además, colócalos solamente sobre mostradores que se encuentren limpios.
El yodo y el azul de metileno son sustancias venenosas, por lo que jamás deberás ingerirlas. Estas sustancias también mancharán la piel (temporalmente), y la ropa (de forma permanente), así que viste ropa que ya no te sirva, cuando vayas a manipular estos químicos.^{[15]XFuente de investigación}

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